Диагностика сифилиса – как определить сифилис? Лабораторная диагностика сифилиса – трепонемные, нетрепонемные тесты

Другие методы лабораторной диагностики сифилиса

1. Бактериоскопия.

2. Методы серологического исследования (неспецифические и специфические).

3. Исследование спинномозговой жидкости (СМЖ).

4. Гистологическое исследование – преимущественно в стадии третичного сифилиса.

5. Бактериоскопическое исследование.

6. Микроскопическое исследование нативного препарата отделяемого эрозивных или язвенных высыпаний или пунктата из лимфоузла для выявления Treponema pallidum.

Материал со слизистых оболочек, кожи половых органов или экстрагенитальной области с подозрительными эрозивными или язвенными дефектами, непосредственно с поверхности твердого шанкра, широкой кондиломы, эрозивных папул получает врач лаборатории или любой другой врач в помещении, где подготовлен микроскоп с темным полем зрения.

Методы диагностики сифилиса введение

Поверхность ulcus durum или эрозивных папул протирается тампоном, смоченным в физиологическом растворе, и затем раздражается бактериологической платиновой или вольфрамовой петлей несколько минут, пока из глубоких слоев не покажется прозрачная тканевая жидкость. Необходимо следить, чтобы к ней не примешивалась кровь, в противном случае это затруднит исследование.

Полученная жидкость переносится петлей на предметное стекло, куда при необходимости можно добавить физиологический раствор. Подготовленный препарат исследуется в темном поле микроскопа. Если результат негативный, исследование повторяется несколько дней подряд, а в промежутках между исследованиями применяются аппликации с физиологическим раствором.

Перед микроскопическим исследованием нельзя использовать антибиотики и местные антисептические средства!

Полученный материал с каплей физиологического раствора, помещенный на предметное стекло и накрытый покровным стеклом, исследуется под микроскопом с помощью объектива с 40-кратным увеличением и окуляра с 10-кратным увеличением. Для микроскопического подтверждения диагноза необходимо обнаружить, по крайней мере, 2-3 морфологически типичные, живые трепонемы с характерными движениями.

Диагноз первичного серонегативного сифилиса может быть подтвержден только при наличии бледных трепонем. У пациентов с приобретенным или с врожденным сифилисом трепонемы обнаруживаются во всех сифилидах как раннего, так и позднего сифилиса. Интенсивность тканевой реакции обратно пропорциональна количеству этих микроорганизмов, наибольшее количество которых находится в первичной сифиломе (твердый шанкр), в региональных лимфоузлах и папулах вторичного свежего сифилиса, а наименьшее – в поздних сифилидах. У пациентов с вторичным сифилисом бледные трепонемы могут обнаруживаться во всех органах.

В циркулирующей крови трепонемы могут присутствовать кратковременно только у пациентов с вторичным свежим сифилисом и ранним врожденным сифилисом. Кровь является неблагоприятной средой для трепонем, которую они быстро покидают, мигрируя в ткани. Чрезвычайно трудно обнаружить трепонемы в цереброспинальной жидкости даже у пациентов с tabes dorsalis и прогрессивным параличом.

Сперма человека является инфекционной. Моча, пот, слюна не являются контагиозными, если они не соприкасаются с мокнущими высыпаниями. Напротив, в молоке матери трепонемы обнаруживаются. У больных сифилисом трепонемы можно выявить в пунктате лимфоузлов, в селезенке и в неспецифических повреждениях (в экссудате полостных элементов различного происхождения, например, в пузырьках herpes simplex). Метод характеризуется низкой себестоимостью, ответ можно получить в течение получаса.

Для быстрой диагностики сифилиса важно, чтобы больной не занимался самолечением. Если поверхность шанкра, кондиломы или эрозивной папулы покрыта корочкой, образовавшейся в результате вторичного инфицирования, ее следует очистить с помощью физраствора.

Раздражение поверхности элемента с целью получения тканевой жидкости необходимо выполнять очень осторожно, чтобы не вызвать кровотечение, поскольку наличие эритроцитов в микропрепарате затрудняет качественную диагностику. Исследование считается положительным только при обнаружении морфологически типичных трепонем с наличием, по крайней мере, 8 завитков и характерными движениями. Treponema pallidum необходимо дифференцировать с Т. refringens, Т. balantidis, Т. phagadenis, Т. gracilis, Т. macrodentinum, T.microdentinim.

В выявлении и подтверждении диагноза сифилиса, особенно в случае поздних и латентных форм заболевания, когда клинические проявления ничтожны или отсутствуют, решающее значение отдается серологическим методам диагностики. Отмечены случаи, когда о заболевании сифилисом свидетельствуют только полученные специфические положительные результаты тестирования при исследовании сыворотки или плазмы.

Диагностика сифилиса – как определить сифилис? Лабораторная диагностика сифилиса – трепонемные, нетрепонемные тесты

К неспецифическим (нетрепонемным) тестам, являющимся методами экспресс-диагностики сифилиса, относятся RPR (Rapid Plasma Reagins), тест с инактивированной сывороткой – МРП (микрореакция преципитации с кардиолипиновым антигеном) и их модификации. Это так называемые флокуляционные тесты, где сформировавшийся в ходе реакции комплекс «антиген антитело» образует хлопья, которые различимы при помощи лупы.

В диагностике сифилиса нетрепонемные тесты используются в качестве скрининговых (отборочных) и не подходят для подтверждения диагноза сифилиса. Такие тесты применяются для обследования больших групп населения во время профилактических осмотров или в эпидемиологически неблагоприятной ситуации. Тесты достаточно чувствительны, технически просты, однако требуют специально обученного персонала.

Результаты тестирования должен оценивать и подтверждать врач. Для экспресс-диагностики используются преимущественно серологические тесты МРП и RPR. Чувствительность нетрепонемных тестов при ранних формах сифилиса составляет приблизительно 70%, в случае вторичного сифилиса – 100%, при латентных формах – 30%.

Неспецифические тесты могут давать ложноположительные результаты в 2-2,8% случаев. У отдельных категорий пациентов, например, у беременных, это число может увеличиваться до 3-3,5%. МРП и RPR становятся позитивными через 1 -4 недели после появления шанкра, то есть через 1-1,5 месяца после инфицирования.

Примерно в 2% случаев наблюдается так называемый феномен «прозоны», когда на фоне выраженной клинической картины сифилиса и положительных результатов специфических серологических реакций RPR могут не давать положительных результатов. В таких случаях положительный результат получают, разбавив образец сыворотки.

Количественные методы (определение титра антител) МРП и RPR используются для контроля эффективности лечения.

При соединении эмульсии кардиолипинового антигена с плазмой или сывороткой больного сифилисом образуется флокулят (комплекс «антиген антитело»), который выглядит как белые снежинки. У каждой из тест-систем (МРП, RPR) имеются свои технические особенности, однако принцип метода одинаков.

Исследуемый материал Плазма или сыворотка, используемые для анализа, должны быть прозрачными. Для тестирования не подходит хилезный или гемолизированный материал.

– Получение плазмы из капиллярной крови: кровь из пальца берут аналогично методике

определения СОЭ. В пипетку Панченко набирается 5% раствор цитрата натрия до отметки «К», а затем выливается обратно в бутылочку до отметки на пипетке «25». Оставшийся цитрат натрия сливается в пробирку для центрифуги, куда добавляют три пипетки крови из пальца пациента, набранной до отметки «К», и перемешивают.

Кровь оставляют при комнатной температуре до разделения плазмы и эритроцитов. Чтобы ускорить процесс, кровь можно центрифугировать. Полученную плазму забирают пипеткой Пастера или специальной пипеткой и используют для диагностики. Для получения плазмы рекомендуется применять специальные микроветы. Материал необходимо доставить в лабораторию в течение 4-6 часов.

– Получение инактивированной сыворотки: сыворотку собирают либо при ее отделении от сгустка при отстаивании крови, либо путем центрифугирования стерильно взятой крови из вены. В холодильнике сыворотку можно хранить при температуре 4°С до 5 дней. В лаборатории полученная сыворотка инактивируется при температуре 5б°С в течение 30 мин. Тестирование выполняется на прозрачных полистироловых пластинах с углублением (МРП) или на специальных картонных пластинах (RPR).

Результаты МРП читают в проходящем свете на черной основе или над световым источником невооруженным глазом или с помощью лупы. В углублениях, где находится плазма или сыворотка больного сифилисом в различных количествах образуются белые хлопья разного размера. Если в углублении отмечаются большие хлопья или их конгломераты, и окружающая жидкость становится прозрачной, результат считается положительным (4 , 3 ).

Мелкие хлопья – результат слабо положительный (2 , 1 ). В отрицательном случае хлопья не образуются (негативный). В сомнительных случаях ( -) следует ориентироваться по «отрицательному контролю». Если в углублении отрицательного контроля хлопья не образуются, результат оценивается как сомнительный ( -).

Как ставится диагноз сифилиса

Диагноз сифилиса ставиться на совокупности данных анамнеза,конфронтации,клинической картины и лабораторных данных,включающих обнаружение возбудителя и результатов серологического обследования.Подтверждение диагноза лабораторными данными обязательно.

В случае полного отсутствия возможности использования методов лабораторной диагностики сифилиса, Всемирная организация здравоохранения (1999 г.) и МЗ РФ ( приказ № 327 от 25.07.2003 г.) допускают использование так называемого синдромного (эпидемиологического) лечения сифилиса на основе клинико-анамнестических данных.

Методы диагностики,подтверждающие наличие сифилиcа

Наименование

Метод проведение

Подтверждающие признаки

Анамнез

Распрос больного

Подтвержденный диагноз сифилиса у полового партнера
Случайная половая связь без барьерного предохранения в период ,соответствующий инкубационному периоду
Наличие в прошлом высыпаний в области половых органов,увеличения лимфоузлов

Клинический осмотр

Осмотр половых органов,кожных покровов,слизистой рта,ануса
Пальпация высыпных элементов при их наличии
Пальпация периферических лимоузлов

Наличие характерных для различных периодов сифилиса поражений кожи и слизистых.
Увеличение лимфоузлов

Обнаружение T.pallidum в материале из очагов поражения,лимфатических узлов,амниотической жидкости,ликвора

Темнопольная микроскопия

Обнаружение типичных форм трепонемы

Прямая реакция иммунофлюоресценции (РИФ-Тр)

Наличие флюоресцирующих трепонем

Полимеразная цепная реакция
ПЦР

Обнаружение специфической ДНК T.pallidum

Нетрепонемные серологические тесты – обнаружение в сыворотке крови антител против фосфолипидов тканей,разрушенных сифилитической инфекцией и липидов мембраны Т.pallidum

Макроскопический тест
Тест быстрых плазменных реагинов (Rapid Plasma Reagins, RPR)

Положительный (позитивный)результат

Микроскопический тест
VDRL (Venereal Disease Research laboratory)
Количественный тест VDRL

Реакция связывания
комплимента
(Реакция Вассермана)

Трепонемные серологические тесты – обнаружение в сыворотки крови антител против антигенов бледной трепонемы

Реакция иммунофлюоресценции
РИФ (FTA)

Положительный (позитивный) результат

Реакция пассивной гемоагглютинации РПГА (TPHA)

Иммуноферментный анализ
ИФА  (ELISA)

Иммуноблотинг

Реакция иммобилизации бледных трепонем РИБТ

Методы диагностики, подтверждающие наличие различных форм и осложнений сифилиса

Наименование

Формы и осложнения

Исследование ликвора

Нейросифилис

Ренгенография
аорты
длинных трубчатых костей
грудины
костей черепа
суставов 

Ранний врожденный сифилис
Поздний врожденный сифилис
Третичный сифилис

Сурдологическое обследование

Неврит слухового нерва
Сифилитический лабиринтит

Офтальмологическое обследование

Неврит зрительного нерва
Паренхиматозный кератит

Также применяются и рутинные методы исследования – общие анализы крови и мочи,биохимический анализ крови и.т.д.

Лечение сифилиса

Длительность лечения и применяемые методы

на разных стадиях сифилиса различны.

– Бензатина бензилпенициллин G либо Бициллин-1 по 2,4 млн. ЕД в/м однократно или

– Бициллин-3 по 1,8 млн. ЕД либо Бициллин-5 по 1,5 млн. ЕД в/м два раза в неделю № 2 или Бензилпенициллина новокаиновая соль по 600 тыс. ЕД в/м два раза в сутки ежедневно в течение 7 дней или

Прокаин бензилпенициллин по 1,2 млн. ЕД в/м один раз в сутки ежедневно № 7 или Бензилпенициллина натриевая соль кристаллическая по 1 млн. ЕД в/м каждые 6 часов (4 раза в сутки) ежедневно в течение 7 дней.

– Бензатина бензилпенициллин G по 2,4 млн. ЕД в/м 1 раз в 7 дней № 2 или

– Бициллин-1 по 2,4 млн. ЕД в/м один раз в 5 дней № 3 или

Лабораторная диагностика

– Бициллин-3 по 1,8 млн. ЕД либо Бициллин-5 по 1,5 млн. ЕД в/м два раза в неделю № 5 или

– Прокаин бензилпенициллин по 1,2 млн. ЕД в/м один раз в сутки ежедневно № 10 или

– Бензилпенициллина новокаиновая соль по 600 тыс. ЕД в/м два раза в сутки ежедневно в течение 10 дней или

– Бензилпенициллина натриевая соль кристаллическая по 1 млн. ЕД в/м каждые 6 часов (4 раза в сутки) ежедневно в течение 10 дней.

– Бензатина бензилпенициллин G по 2,4 млн. ЕД в/м один раз в 7 дней № 3 или Бициллин-1 по 2,4 млн. ЕД в/м 1 раз в 5 дней № 6 или

Бициллин-3 по 1,8 млн. ЕД либо Бициллин-5 по 1,5 млн. ЕД в/м два раза в неделю № 10 или Прокаин бензилпенициллин по 1,2 млн. ЕД в/м один раз в сутки ежедневно № 20 или Бензилпенициллина новокаиновая соль по 600 тыс. ЕД в/м два раза в сутки ежедневно в течение 20 дней или

RPR сифилис

Бензилпенициллина натриевая соль кристаллическая по 1 млн. ЕД в/м каждые 6 часов (4 раза в сутки) ежедневно в течение 20 дней. У больных с давностью заболевания более 6 месяцев рекомендуется использовать бензилпенициллина новокаиновую соль, прокаин бензилпенициллин либо бензилпенициллина натриевую соль кристаллическую.

Бензилпенициллина натриевая соль кристаллическая по 1 млн. ЕД в/м каждые 6 часов (4 раза в сутки) ежедневно в течение 28 дней, через две недели – второй курс лечения бензилпенициллина натриевой солью кристаллической в аналогичных дозах либо одним из препаратов средней дюрантности (бензилпенициллина новокаиновая соль, прокаин бензилпенициллин) в течение 14 дней или

Прокаин бензилпенициллин по 1,2 млн. ЕД в/м один раз в сутки ежедневно № 20, через две недели – второй курс прокаин бензилпенициллина в аналогичной дозе № 10 или Бензилпенициллина новокаиновая соль по 600 тыс. ЕД в/м два раза в сутки ежедневно в течение 28 дней, через 2 недели – второй курс бензилпенициллина новокаиновой соли в аналогичной дозе в течение 14 дней.

Лечение больных висцеральным сифилисом рекомендовано проводить в условиях стационара – дерматовенерологического или терапевтического с учетом тяжести поражения. Лечение проводится дерматовенерологом совместно с терапевтом, назначающим сопутствующую и симптоматическую терапию.

– Бензилпенициллина натриевая соль кристаллическая по 1 млн. ЕД в/м каждые 6 часов (4 раза в сутки) ежедневно в течение 20 дней или

– Бензилпенициллина новокаиновая соль по 600 тыс. ЕД в/м два раза в сутки ежедневно в течение 20 дней или

Прокаин бензилпенициллин по 1,2 млн. ЕД в/м один раз в сутки ежедневно № 20.

Лечение начинается с двухнедельной подготовки антибиотиками широкого спектра действия (тетрациклин, эритромицин, доксициклин). Затем переходят к пенициллинотерапии.

– Бензилпенициллина натриевая соль кристаллическая по 400 тыс. ЕД в/м каждые 3 часа (8 раз в сутки) ежедневно в течение 28 дней, через 2 недели – второй курс бензилпенициллина натриевой соли кристаллической в той же дозе в течение 14 дней или

– Бензилпенициллина новокаиновая соль по 600 тыс. ЕД в/м два раза в сутки ежедневно в течение 28 дней, через 2 недели – второй курс бензилпенициллина новокаиновой соли в аналогичной дозе в течение 14 дней или

– Прокаин бензилпенициллин по 1,2 млн. ЕД в/м один раз в сутки ежедневно в течение 28 дней, через 2 недели – второй курс прокаин бензилпенициллина в аналогичной дозе в течение 14 дней.

– Бензилпенициллина натриевая соль кристаллическая по 10 млн. ЕД в/в капельно два раза в сутки ежедневно в течение 14 дней. Разовую дозу антибиотика разводят в 400 мл изотонического раствора натрия хлорида и вводят в/в в течение 1,5-2 ч. (растворы используются сразу после приготовления) или

Бензилпенициллина натриевая соль кристаллическая по 2-4 млн. ЕД в/в струйно 6 раз в сутки ежедневно (суточная доза 12-24 млн. ЕД) в течение 14 дней. Разовую дозу антибиотика разводят в 10 мл изотонического раствора натрия хлорида и вводят в/в медленно в течение 3-5 минут в локтевую вену.

Для предотвращения реакции обострения (в виде появления или усугубления неврологической симптоматики) в первые 3 дня пенициллинотерапии можно принимать преднизолон в суточной дозе 50-60 мг (однократно утром).

Через 6 месяцев после окончания лечения проводится контрольное исследование ликвора. При отсутствии его санации курс лечения рекомендуется повторить.

Лечение больных поздним нейросифилисом (прогрессирующим параличом, спинной сухоткой) проводится по тем же методикам, которые рекомендованы для лечения больных ранним нейросифилисом. Различие состоит в проведении двух курсов лечения вместо одного, с последующим ликворологическим контролем через 6 месяцев. При отсутствии санации ликвора проводится еще один курс лечения.

При прогрессирующем параличе и спинной сухотке наилучший эффект терапии, как правило, состоит в отсутствии прогрессирования заболевания.

– Бензилпенициллина натриевая соль кристаллическая по 10 млн. ЕД в/в капельно два раза в сутки ежедневно в течение 14 дней, через две недели – второй курс бензилпенициллина натриевой соли кристаллической в аналогичной дозе в течение 14 дней или

– Бензилпенициллина натриевая соль кристаллическая по 2-4 млн. ЕД в/в струйно 6 раз в сутки ежедневно в течение 14 дней, через 2 недели – второй курс бензилпенициллина натриевой соли кристаллической в аналогичной дозе в течение 14 дней. У больных прогрессирующим параличом для предотвращения обострения психотической симптоматики на фоне специфического лечения в начале терапии показано использование преднизолона.

– Доксициклин по 0,1 г per os 2 раза в сутки ежедневно в течение 10 дней для превентивного лечения, 15 дней – для лечения первичного и 30 дней – для лечения вторичного и раннего скрытого сифилиса или

– Тетрациклин по 0,5 г per os 4 раза в сутки ежедневно в течение 10 дней для превентивного лечения, 15 дней – для лечения первичного и 30 дней – для лечения вторичного и раннего скрытого сифилиса или

– Эритромицин по 0,5 г per os 4 раза в сутки ежедневно в течение 10 дней для превентивного лечения, 15 дней – для лечения первичного и 30 дней – для лечения вторичного и раннего скрытого сифилиса или

– Оксациллина натриевая соль или ампициллина натриевая соль по 1 млн. ЕД в/м 4 раза в сутки (каждые 6 часов) ежедневно в течение 10 дней для превентивного лечения, 14 дней – для лечения первичного и 28 дней – для лечения вторичного и раннего скрытого сифилиса или

– Цефтриаксон по 0,5 г в/м один раз в сутки ежедневно № 5 для превентивного лечения и № 10 – для лечения первичного сифилиса; по 1,0 г в/м один раз в сутки ежедневно № 20 для лечения вторичного и раннего скрытого сифилиса.

Одним из предпочтительных препаратов резерва при нейросифилисе является доксициклин, который применяется перорально по 0,1 г 3 раза в день.

Тетрациклин и эритромицин при нейросифилисе применять не рекомендуется, так как они плохо проникают через гематоэнцефалический барьер.

Полусинтетические пенициллины – оксациллин или ампициллин – вводятся внутримышечно по 1 млн. ЕД на инъекцию (доза разводится в 5-6 мл дистиллированной воды) 4 раза в сутки. Длительность лечения – 28 дней.

Цефтриаксон хорошо проникает в органы, ткани и жидкости организма, в частности – в спинномозговую. Кроме того, он обладает высокой трепонемоцидной активностью. При раннем нейросифилисе цефтриаксон назначается по 1,0-2,0 г в/м один раз в сутки ежедневно в течение 20 дней. В тяжелых случаях (сифилитический менингоэнцефалит, острый генерализованный менингит) возможно внутривенное применение препарата и увеличение суточной дозы до 4,0.

– через год после полноценного лечения ранних форм сифилиса не произошло 4-х кратного снижения титра MP (RPR);

– имеет место замедленная негативация серологических реакций в течение двух лет без тенденции к дальнейшему снижению титров/степени позитивности теста или

– клинический/серологический рецидив. Проводится однократно или двукратно. Предпочтительно применение: Бензилпенициллина натриевой соли кристаллической по 1 млн. ЕД в/м каждые 4 часа (6 раз в сутки) ежедневно в течение 20 дней или

– Цефтриаксона по 1,0 г в/м один раз в сутки ежедневно в течение 20 дней.

Лечение детей

– Бензилпенициллина натриевая соль кристаллическая из расчета 100 тыс. ЕД/кг массы тела в сутки в/м, разделенных на 6 инъекций (каждые 4 часа), ежедневно в течение 14 дней или

– Прокаин бензилпенициллин из расчета 50 тыс. ЕД/кг массы тела в сутки в/м один раз в сутки ежедневно в течение 14 дней или

– Бензилпенициллина новокаиновая соль из расчета 50 тыс. ЕД/кг массы тела в сутки в/м, разделенных на две инъекции (каждые 12 часов), ежедневно в течение 14 дней.

Бензилпенициллина натриевая соль кристаллическая из расчета 50 тыс. ЕД/кг массы

тела в сутки в/м, разделенных на 6 инъекций (каждые 4 часа), ежедневно в течение 28 дней; через две недели – второй курс бензилпенициллина натриевой соли кристаллической в аналогичной дозе в течение 14 дней или

Подозрение на сифилис – к какому врачу идти?

Большое распространение заболевание получило потому, что многие молодые люди просто не знают, как определить сифилис, какие обследования необходимо пройти. Лечением половых инфекций занимаются врачи венерологи или дерматовенерологи, так как в большинстве случаев подобные инфекции сопровождаются повреждением кожных покровов.

Что такое трепонемные тесты

Реакция преципитации (РП) — это выпадение в осадок специфического иммунного комплекса, состоящего из растворимого антигена и специфического антитела в присутствии электролита.  Образующееся в результате реакции мутное кольцо или осадок называется преципитат. Разновидностью преципитации является реакция флоккуляции (по Рамону, Ramon)— появление опалесценции или хлопьевидной массы (иммунопреципитации) при при смешении токсина с соответствующей иммунной сывороткой (реакции токсин- антитоксин или анатоксин- антитоксин).

Вскоре после открытия комплементсвязывающего теста было установлено, что реакцию между вассермановским антигеном и сифилитическими сыворотками можно обнаружить по преципитации (флокуляции). Феномен образования преципитата при смешивании липоидного антигена с сывороткой или плазмой крови больного сифилисом был описан Michaelis в 1907 году.

Методы диагностики сифилиса ПЦР

Это стало основой для разработки множества технических модификаций флокуляционного кардиолипинового теста на сифилис. Благодаря простоте, возможности стандартизации, дешевизне и скорости выполнения, они вытеснили из клинической практики классическую реакцию Вассермана и в настоящее время широко используются для скрининга сифилисной инфекции.

Осадочные тесты — цитохолевую реакцию Закс-Витебского и реакцию Кана — в течение длительного времени применяли в составе комплекса стандартных реакций (КСР) для диагностики сифилиса. Исследование проводили в пробирках, в качестве антигена использовали оригинальные прописи, включающие в себя кардиолипин, холестерин и лецитин в различных пропорциях, при этом не требовалось дополнительного введения комплемента. Образующийся комплекс микрофлоккулята был виден невооруженным глазом.

В последующие годы при модификации с целью повышения качества кардиолипин-холестерол-лецитинового антигенного комплекса были разработаны и предложены различные коммерческие варианты методики выполнения флоккуляционных тестов (VDRL, USR, RPR, TRUST), отличающиеся как по техническим параметрам проведения реакции, так и по применяемому антигену (соотношению композитных частей).

Флоккуляционные реакции на основе кардиолипинового антигена относят к нетрепонемным реакциям по причине того, что антиген получают не из возбудителя сифилиса (бледной трепонемы), а при технологическом соединении высокоочищенных биологических реагентов животного происхождения (холестерина, кардиолипина и лецитина). Соотношение ингредиентов антигена в настоящее время стандартизировано.

Быстрый плазмареагиновый тест RPR — это быстрый тест для качественного и количественного определения реагиновых антител в сыворотке или плазме крови. Его относят к макроскопическим нетрепонемным флоккуляционным тестам по выявлению антител, ассоциированных с сифилисом. 

1. История метода

Эта реакция была разработана J.Portnoy и соавторами (1957) для массового и быстрого скрининга населения с использованием образцов сыворотки или плазмы. Реакция проводится на пластиковых планшетах с впечатанными кружочками. 

2. Принцип метода

При добавлении к плазме или сыворотке крови больного сифилисом суспензии стабилизированного кардиолипинового антигена в смеси с мелкодисперсными частицами древесного угля происходит образование комплексов антиген-антитело, собирающих частицы древесного угля в более крупные агрегаты; при этом результат реакции становится возможным учитывать невооруженным глазом.

3. Постановка теста

Авторы метода в 1961 году предложили модификацию RPR на специальных картонных карточках с выдавленными круглыми плоскими неглубокими лунками диаметром 18 мм.

Капля исследуемого образца (неразведенная плазма или сыворотка крови) смешивается в лунке с каплей стабилизированного стандартного кардиолипинового антигена, в который добавлены частицы мелкодисперсного угля (RPR-антиген). Затем в течение 8 мин планшету вращают на орбитальном ротаторе со скоростью 100 об.

/мин, чем достигается стандартизация условий равномерного перемещения нанесенных реагентов. В состав набора входят положительный и отрицательный контроли. Учет результатов проводится при хорошем освещении, когда еще не высохла поверхность кружка. При образовании комплексов антиген-антитело мелкодисперсные частицы угля попадают в образовавшуюся сеть и коагулируют.

Для определения специфического характера позитивных результатов исследования крови в RPR проводят дополнительные исследования в подтверждающих реакциях, основанных на применении антигенов бледной трепонемы (ИФА, РПГА, РИФ, РИТ).

4. Учет результатов

«положительный» — при обнаружении средних и больших агрегатов, 

«слабоположительный» — выявляются редкие небольшие агрегаты, 

«отрицательный» — ровная серая поверхность без видимых агрегатов. 

При положительных результатах рекомендуется исследовать RPR-тест в полуколичественной постановке (разведения от 1:2 до 1:1024). 

5. При каких периодах заболевания лучше использовать

Реакция становится положительной спустя 2—4 недели после появления твердого шанкра.

Ограничениями применения метода RPR являются ранние стадии сифилиса (период инкубации, начало первичного периода), так как данная реакция становится позитивной лишь спустя 2—4  недели после появления твердого шанкра, и поздние стадии (поздний скрытый и третичный сифилис), так как лабильные преципитины первыми элиминируются из организма при длительном течении сифилитической инфекции.

6. Чувствительность и специфичность

Специфичность RPR-теста составляет 98%, а чувствительность зависит от стадии заболевания: при первичном сифилисе — 86%, при вторичном — 100%, при скрытых формах — 98%, при позднем сифилисе — 73% (Кунгуров Н.В. и соавт., 2002). 

7. Область применения метода

Применение указанной реакции при серодиагностике сифилиса регламентировано Приказом Минздрава РФ №87 от 26 марта 2001 года «О совершенствовании серологической диагностики сифилиса» (приложением №1 «Постановка отборочных и диагностических тес¬тов на сифилис»).

Содержание антител-преципитинов в крови после адекватного специфического лечения сифилиса постепенно понижается, что находит отражение сначала в снижении титров, а затем и степени позитивности RPR, которая из резко положительной становится слабоположительной, а затем — отрицательной. В связи с этим RPR используют для оценки эффективности лечения и как один из критериев установления излеченности или при дифференциальной диагностике реинфекции.

8. Источники и причины ошибок при постановке, ложноположительные и ложноотрицательные результаты

Ложноотрицательные результаты. Точно так же, как и в тесте VDRL, при постановке RPR «феномен прозоны» может наблюдаться при постановке с выоскореактивными образцами сывороток. Этот эффект иногда возникает при анализе сывороток, взятых у больных вторичным сифилисом. Поэтому при постановке рекомендуется титрование до тех пор, пока результат не станет однозначным, особенно в случае позитивности трепонемного теста для этого же пациента. 

Ложноположительные результаты (ЛПР) могут быть острыми и хроническими, в зависимости от того, насколько долго они сохраняются: острые — менее 6 месяцев, хронические — 6 месяцев и более. 

Причины острых ЛПР: гепатит, мононуклеоз вызыванный вирусом Эпштейн-Барра, вирусная пневмония, малярия, прививки, беременность, сердечно-сосудистые заболевания, технические ошибки при постановке реакции.

Причины хронических ЛПР: болезни соединительной ткани, болезни иммунной системы, наркомания, лепра, туберкулез, онкопатология, ВИЧ-инфекция, сердечно-сосудистые заболевания, многочисленные переливания крови.

Технические причины ошибочных результатов теста RPR

Реакция быстрого определения реагинов плазмы крови с кардиолипиновым антигеном является относительно несложным исследованием; тем не менее при ее выполнении необходимо соблюдать все рекомендации производителей диагностикума и правила работы в клинико-диагностической лаборатории.

Источником ошибок при постановке RPR могут являться следующие моменты:

исследование в реакции гиперлипидемичной, гемолизированной сыворотки крови или образцов с признаками бактериального пророста;

исключение из постановки реакции контрольных сывороток крови, в частности, слабо-положительных;

неравномерная концентрация антигена в диагностикуме вследствие недостаточного его перемешивания перед использованием;

нарушение сроков учета результатов реакции, подсыхание реакционной среды на пластинах с формированием псевдофлоккулятов в краевой зоне;

нарушение сроков и условий хранения антигена и физиологического раствора; использование диагностикума с истекшим сроком годности;

несоблюдение параметров работы орбитального шейкера (скорости и времени вращения);

использование при постановке реакций загрязненных пробирок, пипеток, наконечников пипеточных дозаторов, реакционных пластинок, растворов;

недостаточная тщательность выполнения последовательных двукратных разведений.

Вышеуказанные ошибки могут приводить к появлению как ложноотрицательных, так и ложноположительных результатов реакции.

9. Особенности, преимущества и недостатки

Методика исследования в RPR проста в исполнении, недорога, не требует специального оборудования и не занимает длительного времени; при этом реакция демонстрирует высокую чувствительность и специфичность. Большинство исследователей отмечают самую высокую чувствительность RPR среди нетрепонемных тестов при всех стадиях сифилиса.

Важным условием является то, что все производимые в мире RPR-наборы являются стандартизированными, что делает их результаты сопоставимыми. Вместе с тем положительные результаты RPR-теста не могут безоговорочно трактоваться как наличие сифилитической инфекции в организме исследуемого пациента без подтверждения трепонемными тестами. RPR-тест непригоден для исследования спинномозговой жидкости.

RPR-тест не является строго специфической реакцией на сифилис. В сыворотке крови людей реагиновые антитела нередко обнаруживают при системных поражениях паренхиматозных органов (печени, почек, легких), при инфаркте миокарда, пневмонии, сотрясении мозга, атеросклерозе, при коллагенозах, онкологических заболеваниях, ряде инфекций (туберкулезе, сыпном тифе, малярии, лепре), при ревматизме, некоторых патологических и физиологических состояниях (тиреотоксикозе, беременности, менструации). Положительные результаты RPR наблюдают после злоупотребления алкоголем, приема жирной пищи, на фоне медикаментозной терапии. Количество ложноположительных результатов увеличивается при исследовании образцов крови пожилых людей.

1. Нетрепонемные тесты служат для выявления антител к нетрепонемным антигенам. 

Распространенные 

нетрепонемные тесты

 — это липидные (реагиновые) реакции. Эти тесты связаны не с определением антител против трепонемы, но с определением антител IgM и IgG к липоидным материалам из разрушенных клеток организма больного сифилисом. Чаще всего эти тесты применяются для 

скрининга

 из-за простоты и дешевизны. В них используется нетрепонемный кардиолипиновый антиген, а сами тесты проводятся в разных вариантах: 

      1) флокуляционные тесты (продукт реакции выпадает в виде хлопьев): микрореакции на стекле с липидными антигенами —экспресс-метод диагностики (микрореакции преципитации — РМП), VDRL (Venereal Disease Research Laboratory test), RPR  (Rapid Plasma Reagin test) и др.; 

      2) реакция связывания комплемента (РСК) с липидными антигенами — реакция Вассермана (РСКк); 

      3) осадочные реакции, которые не используются в настоящее время (реакция преципитации Кана, цитохолевая реакция Закса — Витебского и др.). 

2. Трепонемные тесты — выявление антител к трепонемным антигенам. 

В 

трепонемных тестах

 чаще всего используются антигены Treponema pallidum, нативные (штамм Никольса) или рекомбинантные. Тест, в котором используются живые спирохеты — реакция иммобилизации бледных трепонем (РИТ), в настоящее время выводится из клинической практики из-за дороговизны и сложности.

Групповые антигены являются общими для двух или более видов микробов, входящих в один род, а иногда относящихся и к разным родам. Специфические антигены имеются только у данного вида микроба или даже только у определенного типа либо подтипа внутри вида. Определение специфических антигенов позволяет дифференцировать микробы внутри рода, вида, подвида и даже типа (подтипа). 

Групповые трепонемные реакции определяют антитела к групповым трепонемным антигенам: 

     1) РСК с протеиновым антигеном Рейтера; 

     2) реакция иммунофлюоресценции (РИФ); 

     3) реакция иммунного прилипания (РИП). 

Видоспецифичные протеиновые трепонемные реакции определяют антитела к специфическим видовым антигенам Treponema pallidum: 

    1) реакция иммобилизации бледных трепонем (РИТ или РИБТ); 

    2) РСК с кардиолипиновым антигеном и с трепонемным ультраозвученным антигеном (РСКт).

    3) РИФ-Абс. и ее варианты (IgM-FTA-ABS, 19S-IgM-FTA-ABS, и др.); 

    4) реакция непрямой гемагглютинации бледных трепонем (РПГА) или агглютинации латексных частиц; 

    5) иммуноферментный анализ (ИФА);

    6) иммуноблоттинг (Вестерн-блот и лайн-блот).

В связи с наличием длительных латентных периодов заболевания и неспецифическим характером нетрепонемных тестов,  при проведении 

скрининговых исследований

 все чаще используются тесты, основанные на определении специфических антител против трепонемы в пробах крови. 

Другие методы лабораторной диагностики сифилиса

Что такое иммуноблотинг

Иммуноблотинг (Western blot) для определения специфических IgM либо IgG является одним из современных и
точных методов диагностики сифилиса.При проведении иммуноблотинга T.pallidum подвергаются электрофорезу , в результате чего происходит разделение белковых иммунодетерминант. Затем проводится обработка разделенных точек – blots исследуемой сывороткой и антителами к IgG либо IgM, помеченных ферментами или радиоактивными веществами.

Выявленные с помощью иммуноблотинга определенные
иммунодетерминанты являются диагностическими признаками сифилиса. IgG-иммуноблотинг (IgG Western blot)по чувствительности и специфичности соответствует РИФ-абс.IgM -иммуноблотинг (IgM Western blot) применяется как диагностический тест при врожденном сифилисе.

Где можно сдать анализ на сифилис?

Преимущество бюджетных учреждений состоит в том, что там эта услуга бесплатна. Существенный минус заключается во времени ожидания анализа, слабом материально-техническом обеспечении некоторых государственных поликлиник и в том, что если сифилис выявят, то скрыть этот факт будет затруднительно.

Разумеется, за анализ в частном учреждении придется заплатить, но и результат можно будет узнать через 2-3 дня. Более того, многие клиники без проблем предлагают экспресс-тестирование и сообщают о результатах анализов уже через пару часов.

Ценник на анализ зависит от его вида. Скрининговое исследование обойдется пациенту в 300-400 рублей. Анализ, при котором определяют наличие ДНК в том или ином типе биоматериала, будет стоить в районе 500 рублей.

Методы диагностики сифилиса Темнопольная микроскопия

Разумеется, цены варьируются в зависимости от лабораторий, используемых материалов и итоговой точности самого теста. В этом случае нередко работает правило, согласно которому чем тест дороже, тем он точнее.

Сифилис — коварное заболевание, которое медленно, но верно не только уничтожает внутренние органы, но и затрагивает всю нервную систему человека. К счастью, эта болезнь развивается неспешными темпами, а наука выявила эффективные методы борьбы с ней еще в то время, когда изобрела пенициллин, к которому трепонемы уязвимы до сих пор. Так что главное — вовремя пройти качественное обследование, а после этого обратиться к знающему врачу.

Также вы можете посмотреть видео в этой статье, где врач расскажет вам о РИФ анализе на сифилис.

Современная лабораторная диагностика сифилиса основывается следующих методах:

  • нетрепонемный тест – RPR или VDRL;
  • трепонемные тесты – РИФ и РПГА.

В странах СНГ для диагностики сифилиса чаще применяют реакцию Вассермана, также реакцию иммобилизации бледных трепонем – РИБТ. Оценку полученных результатов производит только врач, который учитывает клинические проявления заболевания, стадию патологии, состояние пациента. С примерными результатами исследований можно ознакомиться в таблице ниже.ото

Положительные серореакции
при отсутствии симптомов сифилиса

Скрытый сифилис

  • трепонемные тесты (РПГА,РИФ,ИФА с трепонемным антигеном) положительные
  • нетрепонемные тесты (МР -RPR,VDRL) – положительные (хотя при позднем скрытом
    сифилисе – давность заболевания более 2 лет -могут быть отрицательные)
  • нет документированного свидетельства о полученном адекватном лечении
    сифилиса

Рекомендации – проведении лечения скрытого сифилиса по
существующим инструкциям

Серопозитивность после лечения сифилиса

  • трепонемные тесты (РПГА,РИФ,ИФА с трепонемным антигеном) положительные или
    отрицательные – значения не имеет
  • нетрепонемные тесты (МР -RPR,VDRL) – положительные,отмечается снижение
    титров в течении года в 4 и более раза
  • есть документированное свидетельство о полученном адекватном лечении
    сифилиса

Рекомендации:Если контрольные тесты не проводились –
назначается количественный нетрепонемный тест (МР) в течении года с интервалом в
3 месяца

Серорезистентность после лечения сифилиса

  • трепонемные тесты (РПГА,РИФ,ИФА с трепонемным антигеном) положительные или
    отрицательные – значения не имеет
  • нетрепонемные тесты (МР -RPR,VDRL) – положительные,отмечается их
    стабильность или снижение титров в течении года менее чем в 4 раза
  • есть документированное свидетельство о полученном адекватном лечении
    сифилиса

Рекомендации:Дополнительное лечение
сифилисаМетоды диагностики сифилиса RIT-тест

Излеченный сифилис

  • трепонемные тесты (РПГА,РИФ,ИФА с трепонемным антигеном) положительные
  • нетрепонемные тесты (МР -RPR,VDRL) – отрицательные
  • есть документированное свидетельство о полученном адекватном лечении
    сифилиса

Рекомендации:Снятие с учета

Если нет
документированного свидетельства о полученном адекватном лечении сифилиса в
прошлом см.ситуация №1 или дополнительно:-исключить ранний сифилис
(серонегатив)- контрольный трепонемный и нетрепонемный тест через 2
недели-исключить поздний скрытый сифилис – исследование
ликвора,клинико-рентгенологическое исследование-исключить ложноположительный
трепонемный тест (провести 2-3 трепонемных теста,включая РИБТ) в
динамике-исключить невенерический трепанематоз-провести лечение позднего
скрытого сифилиса по существующим методикам.

Ложноположительные
реакции на сифилис

  • трепонемные тесты (РПГА,РИФ,ИФА с трепонемным антигеном) отрицательные
  • нетрепонемные тесты (МР -RPR,VDRL) – положительные
  • наличие документированных свидетельств о полученном адекватном лечении
    сифилиса не имеет значения

Рекомендации:Выяснение причин
ложноположительных реакций (АФС,коллагенозы,онкология,туберкулез,беременность
и.т.д.)

Где можно получить еще информацию

Подбор статей и резюме статей по теме из  PubMed (National Library of Medicine)

Темнопольная микроскопия
Ложноположительные результаты серореакций на сифилис

Микрореакция преципитации МР

Реакция Вассермана (РВ)
Реакция иммунофлюоресценции   РИФ  (FTA)
Реакция
пассивной гемоагглютинации   РПГА  (TPHA)

Реакция иммобилизации РИБТ
Иммуноферментный анализ ИФА (EIA)

посещений  246064 обновлено 01.07.10

Понравилась статья? Поделиться с друзьями:
Медицинский блог
Adblock detector